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2F1-F6小鼠雜交瘤細(xì)胞
貨號:BY-1176
品牌:乾思細(xì)胞
規(guī)格:T25瓶
目錄價:詢價
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2F1-F6 小鼠雜交瘤細(xì)胞概述

一、基本定義與來源

2F1-F6 小鼠雜交瘤細(xì)胞是通過經(jīng)典的細(xì)胞融合技術(shù)構(gòu)建的單克隆抗體分泌細(xì)胞系。其命名通常源于96 孔板克隆篩選時的孔位編號(如第 2 列 F 行第 1 孔至 F6 孔),表明該細(xì)胞可能是從同一融合批次中篩選出的系列克隆。這類細(xì)胞由免疫小鼠的脾 B 淋巴細(xì)胞(經(jīng)特定抗原刺激)與骨髓瘤細(xì)胞(如 SP2/0 或 NS0)融合而成,兼具抗體特異性分泌能力無限增殖特性,是制備單克隆抗體的核心工具。

二、生物學(xué)特性與培養(yǎng)條件

  1. 細(xì)胞形態(tài)與生長特性
    • 形態(tài):顯微鏡下呈圓形或橢圓形,懸浮生長為主,部分細(xì)胞可能輕度貼壁;細(xì)胞大小均一,核質(zhì)比高,分裂期可見雙核或多核形態(tài)。
    • 生長曲線:對數(shù)生長期約為 24~48 小時,適宜密度維持在 1×10?~1×10? cells/mL,超過 1×10? cells/mL 易因營養(yǎng)匱乏或代謝廢物積累導(dǎo)致凋亡。
    • 培養(yǎng)條件
      • 培養(yǎng)基:常用含 10% 胎牛血清(FBS) 的 RPMI 1640 或 DMEM 培養(yǎng)基,可添加 1% 非必需氨基酸、丙酮酸鈉等增強細(xì)胞活力。
      • 環(huán)境:37℃、5% CO?、飽和濕度,需定期換液(每 2~3 天一次)或進行半量換液以維持營養(yǎng)。
  2. 抗體分泌特性
    • 抗體類型:分泌的單克隆抗體亞型(如 IgG1、IgG2a、IgM 等)需通過 亞型鑒定試劑盒 確定,其抗原結(jié)合特異性由重鏈和輕鏈可變區(qū)(V 區(qū))決定。
    • 滴度與純度:培養(yǎng)上清液中抗體滴度通常為 1~10 μg/mL,可通過辛酸 - 硫酸銨沉淀或 Protein A/G 親和層析純化至≥95% 純度。
    • 穩(wěn)定性:連續(xù)傳代 30 代以上需驗證抗體分泌一致性,長期保存建議液氮凍存原始克隆以避免遺傳漂變。

三、制備與鑒定流程

  1. 關(guān)鍵制備步驟
    • 小鼠免疫:選用 6~8 周齡 BALB/c 小鼠,通過腹腔注射目標(biāo)抗原(如蛋白、多肽、細(xì)胞或病毒抗原),間隔 2~3 周加強免疫 2~3 次,末次免疫后 3~5 天取脾臟。
    • 細(xì)胞融合
      • 脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞按 5:1~10:1 比例 混合,加入 PEG(分子量 4000)誘導(dǎo)融合,隨后用 HAT 培養(yǎng)基 篩選(淘汰未融合的親本細(xì)胞)。
      • 融合效率通常為 10??~10?3,陽性克隆率依賴抗原免疫原性和篩選靈敏度。
    • 克隆化與篩選:通過 有限稀釋法 將細(xì)胞密度降至 0.5~1 cell / 孔,利用 ELISA、流式細(xì)胞術(shù)或免疫熒光篩選分泌特異性抗體的克?。ㄈ?2F1-F6 系列)。
  2. 鑒定內(nèi)容與方法
    • 抗體特異性
      • ELISA:檢測上清對目標(biāo)抗原的結(jié)合活性,設(shè)置陰性克隆(如未免疫小鼠來源細(xì)胞)作為對照。
      • Western blot / 免疫熒光:驗證抗體與天然或變性抗原的反應(yīng)性,排除非特異性結(jié)合(如與同源蛋白家族的交叉反應(yīng))。
    • 細(xì)胞身份驗證:通過 STR 分型 比對標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(如 ATCC)確認(rèn)細(xì)胞系無誤;檢測染色體數(shù)目(雜交瘤細(xì)胞通常含 90~120 條染色體,介于脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞之間)。
    • 微生物污染檢測:定期進行支原體(如 PCR 法)、細(xì)菌、真菌培養(yǎng),確保無外源污染(如 Mycoplasma hyorhinis)。

四、應(yīng)用場景與技術(shù)拓展

  1. 單克隆抗體制備與應(yīng)用
    • 科研工具:分泌的抗體可用于免疫組化(IHC)、免疫沉淀(IP)、流式細(xì)胞術(shù)(FACS)等實驗。例如,若 2F1-F6 抗體靶向某腫瘤標(biāo)志物,可用于腫瘤細(xì)胞的體外分型或體內(nèi)成像。
    • 診斷與治療
      • 在體外診斷中,可開發(fā)為 ELISA 試劑盒(如病原體抗原檢測)或膠體金試紙條;
      • 在治療領(lǐng)域,抗體可偶聯(lián)藥物(ADC)、放射性核素或細(xì)胞毒素,實現(xiàn)靶向殺傷(如 CD 抗原特異性抗體用于免疫治療)。
  2. 細(xì)胞工程與功能改造
    • 利用 CRISPR/Cas9 技術(shù) 對 2F1-F6 細(xì)胞進行基因編輯:
      • 敲入熒光蛋白基因(如 GFP、mCherry),用于實時追蹤抗體分泌細(xì)胞;
      • 敲除 Fc 受體基因(如 FcγR),減少非特異性結(jié)合,提升抗體純化效率。
    • 雙特異性抗體開發(fā):通過雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù)或基因共轉(zhuǎn)染,構(gòu)建同時識別兩種抗原的雙特異性抗體分泌細(xì)胞,拓展其在腫瘤免疫中的應(yīng)用(如靶向 T 細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的 BiTE 抗體)。
  3. 大規(guī)模生產(chǎn)與工藝優(yōu)化
    • 采用 無血清培養(yǎng)基 和 生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)(如波浪式反應(yīng)器或攪拌式反應(yīng)器),通過優(yōu)化溶氧、pH 值和營養(yǎng)補料策略,可將抗體產(chǎn)量提升至 10~100 mg/L,滿足工業(yè)級制備需求。

五、保存與質(zhì)量控制要點

  1. 凍存與復(fù)蘇
    • 凍存液:含 10% DMSO、90% FBS,按 1×10?~5×10? cells/mL 密度分裝;
    • 程序降溫:-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時 37℃快速融化,存活率應(yīng)≥85%。
  2. 質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)
    • 細(xì)胞活性:臺盼藍(lán)染色法檢測,活細(xì)胞比例需>90%;
    • 抗體效價:間接 ELISA 測定,效價(滴度)需穩(wěn)定在 1:10?~1:10? 以上;
    • 遺傳穩(wěn)定性:每 10 代進行染色體核型分析,確??寺?nèi)細(xì)胞染色體數(shù)目一致(如均為 100 條左右)。

六、注意事項與挑戰(zhàn)

  1. 克隆異質(zhì)性:同一系列克?。ㄈ?F1 至 F6)可能因融合時 B 細(xì)胞來源不同,導(dǎo)致抗體特異性或親和力差異,需逐一驗證功能一致性。
  2. 長期培養(yǎng)風(fēng)險:連續(xù)傳代可能導(dǎo)致抗體分泌基因沉默或突變,建議定期從凍存庫中復(fù)蘇原始克隆以維持穩(wěn)定性。
  3. 替代技術(shù)競爭:隨著噬菌體展示技術(shù)和單細(xì)胞測序技術(shù)的發(fā)展,雜交瘤細(xì)胞在抗體發(fā)現(xiàn)中的傳統(tǒng)優(yōu)勢面臨挑戰(zhàn),但其在抗體穩(wěn)定生產(chǎn)中的地位仍不可替代。

總之,2F1-F6 小鼠雜交瘤細(xì)胞作為特異性抗體的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)平臺,在基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中具有重要價值。通過結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),其應(yīng)用場景將進一步向精準(zhǔn)醫(yī)療和個性化治療領(lǐng)域拓展。
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