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一、細(xì)胞來源與歷史背景

二、生物學(xué)特性

1. 形態(tài)與生長特性
   BHK-21 細(xì)胞貼壁生長時(shí)呈梭形或成纖維細(xì)胞樣，細(xì)胞輪廓清晰，貼壁能力強(qiáng)，可在培養(yǎng)瓶表面形成均勻單層。在對(duì)數(shù)生長期，細(xì)胞倍增時(shí)間約為 12–24 小時(shí)，增殖速度快，適合大規(guī)模培養(yǎng)。
2. 分子與功能特征
   • 病毒易感性：對(duì)多種病毒（如痘苗病毒、單純皰疹病毒、副流感病毒等）高度敏感，是研究病毒復(fù)制機(jī)制和制備病毒疫苗的理想模型。
   • 轉(zhuǎn)染效率高：易于通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、電穿孔等方法導(dǎo)入外源基因，常用于重組蛋白表達(dá)和基因功能研究。
   • **性：作為非腫瘤源性細(xì)胞系，BHK-21 在疫苗生產(chǎn)中具有較低的致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，符合生物制品**性要求。

三、培養(yǎng)方法與條件

1. 培養(yǎng)基與營養(yǎng)需求
   常用培養(yǎng)基為MEM（Minimum Essential Medium）或DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），需添加 10%–15% 胎牛血清（FBS）提供生長因子，同時(shí)補(bǔ)充 1% 雙抗（青霉素 / 鏈霉素）防止污染。pH 值需維持在 7.2–7.4，滲透壓控制在 280–320 mOsm/kg。
2. 培養(yǎng)環(huán)境
   細(xì)胞需在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，濕度保持在 95% 以上。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 80%–90% 時(shí)，需進(jìn)行傳代：用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化液處理，輕柔吹打后按 1:3–1:5 比例接種至新培養(yǎng)瓶。
3. 凍存與復(fù)蘇
   凍存液采用 “90% FBS+10% DMSO”，細(xì)胞密度調(diào)整為 1×10?–5×10? cells/mL，經(jīng)程序降溫（-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮）長期保存。復(fù)蘇時(shí)需快速解凍（37℃水?。?，離心去除凍存液后更換新鮮培養(yǎng)基，以減少 DMSO 對(duì)細(xì)胞的毒性。

四、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 病毒學(xué)研究與疫苗生產(chǎn)
   • 病毒增殖：BHK-21 是生產(chǎn)獸用疫苗（如口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗）的核心細(xì)胞系，因其高效支持病毒復(fù)制且易于大規(guī)模培養(yǎng)。
   • 病毒載體構(gòu)建：用于制備腺病毒、慢病毒等基因治療載體，或研究病毒與宿主細(xì)胞的相互作用機(jī)制。
2. 重組蛋白表達(dá)
   通過基因工程改造，BHK-21 可高效表達(dá)外源蛋白（如細(xì)胞因子、受體蛋白），尤其適用于需要翻譯后修飾的復(fù)雜蛋白生產(chǎn)，部分重組蛋白已應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域。
3. 藥物毒性與細(xì)胞生物學(xué)研究
   • 作為體外模型評(píng)估藥物對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的毒性作用，檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、增殖率或凋亡指標(biāo)。
   • 用于研究細(xì)胞信號(hào)通路、細(xì)胞黏附機(jī)制及細(xì)胞周期調(diào)控等基礎(chǔ)生物學(xué)問題。
4. 生物制品質(zhì)量控制
   在疫苗和重組蛋白生產(chǎn)中，BHK-21 可用于病毒滴度測(cè)定、外源因子檢測(cè)等質(zhì)量控制環(huán)節(jié)，確保產(chǎn)品**性與有效性。

五、注意事項(xiàng)

• 細(xì)胞污染監(jiān)測(cè)：定期檢查細(xì)胞形態(tài)及培養(yǎng)基狀態(tài)，避免細(xì)菌、真菌或支原體污染（可通過 PCR 或熒光染色檢測(cè)）。
• 傳代次數(shù)控制：長期傳代可能導(dǎo)致細(xì)胞特性改變（如核型異常），建議使用低代次細(xì)胞（<20 代）進(jìn)行關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)。
• **性操作：涉及病毒培養(yǎng)時(shí)，需在生物**柜中操作，并遵循相應(yīng)等級(jí)的實(shí)驗(yàn)室**規(guī)范。

總結(jié)